2023-11-14

肝素生产方法

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方法一、酶解-树脂法酶解 取100kg新鲜肠黏膜(总固体5%-7%),加苯酚200ml (0.2%),如气温低时可不加。在搅拌下加入绞碎胰0.5-1kg(0.5%-1%),用 300-400g/L(30%-40%)NaOH溶液调节pH8.5-9,升温至40-45℃,保温2-3h。pH8,再加5kg粗食盐(5%)升温至90℃左右,用6mol/L HCl调节pH 6.5左右,停止搅拌,保温20min,以布袋过滤,得酶解滤液。肠黏膜[胰浆,NaOH]→[pH8.5-9, 40-45℃, 保温2-3h]肠黏膜液[NaCl, 6mol/L HCl]→[pH8; 90℃, pH6.5]滤液吸附、洗涤、洗脱 取上述滤液冷至50℃以下,用6mol/L NaOH调节pH7,加入5kgD-254强碱性阴离子交换树脂,搅拌5h左右,交换完毕,弃去液体,用自来水漂洗树脂至水清,用与树脂等体积的2mol/L NaCl,搅拌洗涤15min,弃去洗涤液,再加2倍树脂体积的1.2mol/L NaCl洗涤2次。用约树脂体积一半的5mol/L NaCl洗脱1h,收集洗脱液,然后用约树脂体积的1/3的3mol/L NaCl洗脱2次,合并洗脱液。滤液[D-254树脂, NaOH]→[pH7, 5h]吸附[NaCl]→[2mol/L→1.2mol/L, →5mol/L, →3mol/L]洗脱液沉淀、脱水、干燥 将洗脱液用滤纸浆助滤,过滤1次,澄清滤液以体积计加入用活性炭处理过的0.9倍的95%乙醇,冷处沉淀8-12h。虹吸上清液弃去,按100kg黏膜加300ml的比例向沉淀中补加蒸馏水,再加入4倍量95%乙醇,冷处放置6h,收集沉淀,用无水乙醇脱水1次,丙酮脱水2次,置P2O5干燥器真空干燥,得肝素钠粗品。洗脱液 → 沉淀物[无水乙醇;丙酮]→[P2O5]肝素钠粗品脱色、沉淀、干燥 用20g/L(2%)氯化钠溶液配成100 g/L(10%)的肝素钠溶液,以40g/L(4%)高锰酸钾溶液进行氧化脱色,每亿单位估计加入0.65mol高锰酸钾。先将药液调至pH8,预热80℃,在搅拌下加入高锰酸钾,保温2.5h,以滑石粉助滤剂,过滤,收集滤液。将滤液调节pH6.4,用0.9倍的95%乙醇置于冷处理沉淀6h以上,收集沉淀,溶于10 g/L(1%)氯化钠溶液中,用量按肝素钠粗品质量收率60%-70%计,配成50 g/L(5%)肝素钠溶液,再用4倍量的95%乙醇冷处放置6h以上,收集沉淀物,用无水乙醇、丙酮脱水,乙醚洗涤1次,置P2O5干燥器中干燥,得肝素钠精品。肠黏膜换算成总固体7%计,收率20000U/kg,最高效价141.6U/mg。肝素钠粗品[20g/L NaCl]→肝素钠溶液[KMnO4]→[pH8, 80℃, 2.5h]滤液 →[pH6.4, 6h]沉淀物[无水乙醇;丙酮;乙醚]→肝素钠精品注射剂的制备 取肝素钠成品溶于一定量注射用水中,封口,灭菌,即得。肝素钠精品[注射用水]→注射剂


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